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摘要: 目的构建重组耻垢分枝杆菌MS_Csm4,研究Csm4蛋白在耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis, MS)中表达影响胞内存活的机制。方法PCR扩增Csm4基因，构建重组pMV261-Csm4穿梭表达质粒,将重组质粒和空白质粒电穿孔进MS生成MS_Csm4和MS_V重组菌,经Western blot对重组菌Csm4蛋白表达进行检测。体外培养观察MS_Csm4和MS_V生长曲线以及检测活性氮、活性氧环境下的菌落数(CFU)变化。进一步，MS_Csm4和MS_V重组菌感染人源巨噬细胞THP-1，计数CFU反映胞内存活，实时荧光定量PCR检测诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS) 表达。硝酸还原酶法NO试剂盒检测一氧化氮(nitric oxide, NO)释放指标。结果Csm4蛋白在MS_Csm4中成功表达,且其表达不影响MS_Csm4的生长情况；MS_Csm4在体外活性氮、氧环境中CFU计数下降，与MS_V相比，差异有统计学意义(PCsm4作用于THP-1细胞后诱导iNOS表达上调。促进NO的释放以及减少胞内生存，与MS_V相比，差异有统计学意义(PCsm4不能耐受体外活性氮、氧压力环境，诱导宿主细胞iNOS表达上调，促进NO释放，从而影响其胞内生存能力。